细胞迁移与侵袭实验：Transwell实验全攻略
细胞迁移与侵袭是细胞生物学中的关键过程，广泛应用于肿瘤转移、胚胎发育、免疫反应和伤口愈合等研究领域。今天，我们将深入探讨Transwell实验，一种经典的体外实验方法，用于评估细胞的迁移和侵袭能力。
实验简介
Transwell实验利用带有微孔的聚碳酸酯膜将孔板分隔成上下两部分，上室加入待测试细胞，下室加入含有趋化因子的培养基。实验者可以通过染色或计数迁移至下腔的细胞，评估其迁移或侵袭能力。
（一）细胞迁移实验
细胞迁移是指细胞在特定化学信号或其他刺激下，从一个位置移动到另一个位置的过程。Transwell迁移实验通过在上下两层培养基之间建立一个化学梯度，诱导细胞迁移。主要应用于肿瘤转移研究、免疫反应研究（免疫细胞的趋化性）和伤口愈合研究。
（二）细胞侵袭实验
细胞侵袭是指细胞通过细胞外基质（ECM）的能力，是肿瘤转移过程中的关键步骤。在Transwell侵袭实验中，通常会在小室的上室面铺上一层基质胶，模拟细胞外基质环境。主要应用于肿瘤转移研究和胚胎发育研究。
实验步骤
（一）细胞迁移实验
1.细胞准备：
提前一天更换为无血清培养基，将细胞饥饿12-24h，去除血清的影响。
使用0.25%胰酶溶液将细胞从培养皿中分离，离心后用无血清培养基重悬。
根据细胞类型调整细胞浓度，通常为5×105个/mL（可根据具体情况进行适当调整）。
2.Transwell小室准备：
向Transwell上室加入100 µL细胞悬液，下室加入600 µL含有趋化因子（如10% FBS）的培养基。
3.培养与观察：
将培养板放入37℃、5% CO2的培养箱中，培养12-48小时（根据细胞种类调整）。
培养结束后，用棉签轻轻擦去上室未迁移的细胞。
用4%多聚甲醛固定细胞，结晶紫染色后显微镜下观察并计数。
（二）细胞侵袭实验
1.细胞准备：同（一）中细胞准备步骤。
2.Transwell小室准备：
1)1:8稀释基质胶：100 μL基质胶加入800μL无血清培养基，吹打混匀后，弹动EP管使液体集中在管底（稀释后的基质胶浓度参考1mg/mL，不超过 3mg/mL；稀释比例并不固定，也可以取中间值1:4）。
2)混匀后立即吸取50μL稀释后的基质胶到Transwell小室上层，逐滴加入，盖上盖子震板3-5次，使得每个小室上层液面平齐。
3)置于37℃培养箱中2-4h充分凝固。
4)使用前需进行水化，加入200μL无血清培养基水化30min（润透即可，时间可延长）。
5)向Transwell上室加入100 µL细胞悬液，下室加入600 µL含有趋化因子（如10% FBS）的培养基。
3.培养与观察：
将培养板放入37℃、5% CO2的培养箱中，培养12-48小时（根据细胞种类调整）。
培养结束后，用棉签轻轻擦去上室未侵袭的细胞。
用4%多聚甲醛固定细胞，结晶紫染色后显微镜下观察并计数。
注意事项
细胞状态：确保细胞在实验前处于良好的生长状态，避免细胞损伤。可在实验前对细胞进行活力检测。
无菌操作：整个实验过程需在无菌环境下进行，避免细胞支原体污染。必要时可对细胞进行支原体检测。
基质胶处理：基质胶铺平需均匀，避免气泡产生。同时避免在小室和下层培养液之间产生气泡，因为气泡会减弱趋化作用。
培养条件：严格控制培养箱的温度和CO2浓度，确保细胞正常生长。
Transwell实验因其操作简便、结果可靠，已成为细胞迁移与侵袭研究中的重要工具。希望这篇文章能帮助你在实验中取得更好的结果！如果有任何疑问或需要进一步的帮助，欢迎留言交流哦。
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