CleanRNA T7 RNA Polymerase；CleanRNA T7 RNA转录酶（250 U/uL）
产品简介
本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶，是对野生型T7进行改造优化突变得到的，可以大幅度降低dsRNA含量的T7 RNA聚合酶。CleanRNA T7 RNA转录酶以含有T7启动子序列的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或 5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可作为体外合成RNA的模板。
产品信息
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货号 |
N120002E/N120002S/N120002M |
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规格 |
10 KU /100 KU/250 KU |
产品性质
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来源 |
重组 E.coli |
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最适温度 |
37℃ |
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活性 |
250 U/μL |
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宿主核酸残留 |
<10 fg/U |
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宿主蛋白残留 |
<50 ppm |
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RNA 酶残留 |
阴性 |
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储存缓冲液
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50mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃ |
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活性单位定义
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在 37℃、pH8.0的条件下，1 h内使1 nmol的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为一个活性单位 |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
N120002E |
N120002S |
N120002M |
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N120002-A |
CleanRNA T7 RNA转录酶（250 U/μL） |
40 μL |
400 μL |
1 mL |
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N120002-B |
10×Transcription Buffer |
500 μL |
1 mL×5 |
10 mL |
储存条件
-25 ~ -15℃保存，有效期1年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅用于科研。
使用说明
1. 将所用实验材料从 -20℃拿出，置于冰盒上解冻，充分混匀，短暂离心收集液体于管底，置于冰上备用。
2. 反应体系配制:
1) 普通转录体系
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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10×Transcription Buffer |
2 |
1× |
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CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each) |
2 each |
10 mM each |
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CleanRNA T7 RNA转录酶（250 U/μL） |
1-1.6 |
- |
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Murine RNase inhibitor (40 U/μL) |
0.5 |
- |
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Pyrophosphatase, Inorganic (0.1 U/μL) |
0.4 |
- |
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模板 DNA |
X (1 μg) |
- |
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RNase free H2O |
Up to 20 |
- |
2) 共转录加帽体系
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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10×Transcription Buffer |
2 |
1× |
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CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each) |
2 each |
10 mM each |
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Cap1帽子 (100 mM ) |
2 |
10 mM |
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CleanRNA T7 RNA转录酶 (250 U/μL) |
1-1.6 |
- |
|
Murine RNase inhibitor (40 U/μL) |
0.5 |
- |
|
Pyrophosphatase,Inorganic (0.1U/μL) |
0.4 |
- |
|
模板 DNA |
X (1 μg) |
- |
|
RNase free H2O |
Up to 20 |
- |
【注意】
1) 若转录长度< 100 nt，模板投入量可增加至 2 μg，转录时间可增至4-8 h。
2) 为了提高RNA质量，建议使用质粒线性化模板进行转录。
3) 以上反应体系为推荐反应，NTP，帽子添加量，T7 RNA聚合酶等均可根据实际情况进行适度调整。
4) 20 μL转录体系，参考如上体系可获得 180-240μg的RNA，若想获得更多的RNA，可等比例放大反应体系，不影响反应。
5) 使用试剂、容器等无 RNase 污染。
3. 在 37℃下反应 2-3 h。
4. 反应结束后，加入 1 μL DNase I，在37℃反应15 -30 min 去除DNA模板。
5. 合成的RNA后续需进行纯化、质控，样品合格可用于后续实验。
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