CFDA SE Cell Proliferation and Tracking Probe；CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针
产品简介
CFDA-SE ，英文全称 Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester ，是二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate，FDA） 的衍生物 ，具有细胞膜渗透性 ，可对活细胞进行荧光标记。
CFDA-SE 本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后 ，可被胞浆内的酯酶催化生成 羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester ，CFSE） ，后者可发出强烈的绿色荧 光 ，不能穿透细胞膜 ，因此能完好地保留在胞内。CFDA-SE 标记细胞的荧光非常均一 ，可随着细胞的分裂 增殖而被子代细胞均匀继承 ，其含量的衰减与细胞分裂次数成正比 ，该荧光信号可在 488 nm 的激发光下 进行检测。CFSE 还可自发性不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联 的 CFDA-SE 通过被动扩散回到细胞外培养基内 ，被后续清洗步骤所清除。
CFDA-SE 不仅可用于细胞增殖的体外实验 ，还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。经 CFDA-SE 标记 的非分裂细胞的荧光非常稳定 ，稳定标记的时间可达数月 ，因此非常适用于细胞群落分析。
本品以粉末形式提供 ，需用 DMSO 制备储存液后再使用。
产品性质
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中文名称（Chinese Synonym） |
5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯 |
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英文名称（English Synonym） |
5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester |
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CAS 号（CAS NO.） |
150347-59-4 |
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分子式（Molecular Fomular） |
C29H19NO11 |
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分子量（Molecular Weight） |
557.46 |
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纯度（Purity） |
≥94%（HPLC） |
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外观（Appearance） |
类白色固体 |
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Ex/ Em |
494/521 nm |
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结构式（Structure） |
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储存条件
室温运输。-20℃干燥避光保存 ，有效期 2 年。避免反复冻融。
注意事项
1. 不同的细胞其细胞内酯酶活性不同 ，因此染色效果具有差异性。
2. 荧光染料均存在淬灭问题 ，染色过程需尽量避光。
3. 为了您的健康 ，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
4. 本产品仅用于科研。
使用说明
1. CFSE 储存液（5 mM） 的配制
用 1 mL DMSO 溶解 2.79 mg CFSE，充分混匀即得到 5 mM 的储存液（1 mg/ml 的 CFSE 溶液浓度相当于 其摩尔浓度 1.8 mM）。
【注意】该储存液需立即使用，根据使用量计算如有剩余请务必分装后于≤-20℃避光干燥保存，避免反复 冻融。
2. CFSE 工作液（0.5-5 µM） 的配制
使用前用含 20 mM Hepes 的 Hanks 缓冲液（HHBS） 或其他不含氨基的合适缓冲液（pH=7.0）对上述 CFSE 储存液进行 1,000~10,000 倍稀释 ，并旋涡震荡混匀。
3. 操作步骤
【注意】 以下是针对活细胞染色的推荐步骤 ，可根据实际情况进行细胞药物处理 ，适当调整实验步骤。
1) 离心收集细胞 ，调整细胞浓度为 1-5×105 个/管；
2) 用 500 µL CFSE 工作液悬浮细胞 ，于室温或 37℃避光孵育 10-30 min；
3) 吸除 CFSE 染液 ，用 HHBS 或其他合适缓冲液清洗细胞 ，用 500 µL 预热 HHBS 或培养液悬浮细胞；
4) 在 Ex/Em=490/520 nm 下用流式细胞仪（FL1 通道）或荧光显微镜观察细胞。
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