一、实验材料
Arcegen标准基质胶(Cat#C231001）、DMEM、PBS缓冲液、去离子水、4%多聚甲醛、0.1%结晶紫染色液、24孔细胞培养板、Transwell小室（8μm）、超净工作台
二、实验步骤
第1天上午 ，Transwell 小室铺胶
1）1:8 稀释基质胶：100μL基质胶加入800μL无血清培养基，吹打混匀后，弹动 EP管使液体集中在管底（稀释后的基质胶浓度参考1mg/mL，不超过3mg/mL； 稀释比例并不固定，也可以取中间值1:4）。
2）混匀后立即吸取50μL稀释后的基质胶到Transwell 小室上层，逐滴加入，液面厚度3mm，盖上盖子震板3-5次，使得每个小室上层液面平齐。
3）置于37℃培养箱中2-4h充分凝固。
4）使用前需进行水化，加入200μL无血清培养基水化30min（润透即可，时间可延长）。
第1天下午，制备 Hela 细胞悬液以及细胞接种
1）提前一天更换为无血清培养基，将细胞饥饿12-24h，目的是为了去除血清的影响。
2）使用胰酶消化Hela细胞，终止消化后离心弃掉培养液，使用PBS清洗1-2次，使用含BSA 的无血清培养基重悬调整Hela 细胞密度为5×104-5×105个/mL。
3）取100-200μL Hela细胞悬液加入Transwell小室上层。
4）在24孔板的下室加入600μL含20% FBS 的培养基。
注：添加时需避免下室中的培养液和小室间产生气泡，如有气泡会影响下层培养液的趋化作用，使其减弱甚至消失。
5） 于 37℃ 5% CO2培养箱中培养12-48h（培养时间依据癌细胞的侵袭能力而定）。
第3天上午，染色及统计
1）取出 Transwell 小室弃去孔中培养液，使用棉签轻轻擦拭上层未迁移的细胞。使用不含钙镁离子的 PBS 缓冲液清洗2次。
2）使用4%多聚甲醛对细胞固定30min，或使用75%乙醇固定10min。
3）弃掉固定液，PBS清洗3次，加入适量0.1%结晶紫染色液室温染色30min。
4）染色完成后使用去离子水进行清洗，直至清洗液无明显紫色。于200×和 400×显微镜下观察并拍照统计。
三、实验结果
培养 48h 后 Hela 细胞结晶紫染色结果，迁移到 PET 膜下层的 Hela 细胞数量较多。
200×
400×
四、产品推荐
| 产品归类 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
| 基质胶 |
Arcegel Matrix LDEV-Free；Arcegel基质胶，无LDEV |
C231001 |
5 mL/10 mL |
|
Arcegel Matrix Phenol Red-Free, LDEV-Free； Arcegel基质胶，无酚红，无LDEV |
C231002 | 5 mL/10 mL | |
| 培养基 | C231115 | 500 mL | |
| C231114 | 500 mL | ||
| 缓冲液 | C230135 | 500 mL |
