肿瘤转移是癌症治疗的最大挑战之一，而细胞侵袭实验是研究癌细胞迁移能力的“黄金标准”！如何利用基质胶精准构建体外侵袭模型？实验关键步骤与试剂如何选择？希望这篇分享能给您答疑解惑~
细胞侵袭实验
细胞侵袭实验通过模拟癌细胞穿透基底膜的过程，评估其迁移与侵袭能力，广泛应用于抗肿瘤药物筛选、转移机制研究及靶向治疗开发。
实验中，基质胶作为基底膜替代物，为细胞提供三维微环境，结合Transwell小室形成物理屏障。癌细胞必须先分泌蛋白酶（如基质金属蛋白酶MMPs）降解基底膜和周围的细胞外基质，才能从原发肿瘤脱落并侵入周围组织，最终发生转移。细胞穿过胶和膜的多少，直接反映了癌细胞转移能力。
实验优势：
- 高灵敏度：可检测微量药物对侵袭的抑制作用；
- 可视化强：通过染色直接观察侵袭细胞；
- 适用性广：支持多种肿瘤细胞
细胞侵袭实验步骤
1、首先将拿到的基质胶冻融后按照原液1:8稀释（终浓度不要超过3 mg/mL来包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃、30 min - 8 h使基质胶聚合成凝胶，使用前用无血清培养基进行基底膜水化30 min。
2、将细胞饥饿12 - 24 h以去除血清的影响。
3、消化细胞，终止消化后离心弃去培养液并用PBS洗1 - 2次，用含无血清培养基重悬调整细胞密度至4×104~5×105个/mL 。
4、取细胞悬液100 μL加入Transwell小室。
5、在24孔板下室加入600 μL含20%FBS培养基，添加时要避免下层培养液和小室间产生气泡，产生气泡易使下层培养液的趋化作用减弱甚至消失。
6、培养细胞:常规培养12 - 48 h(时间主要依癌细胞侵袭能力而定)。
7、取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用不含钙的PBS清洗2遍，4%多聚甲醛固定10 - 30 min，将小室适当风干。
8、使用0.1%结晶紫染色20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍于显微镜下随即5个视野观察细胞，记数。
实验结果
细胞侵袭后经结晶紫染色的结果
常见问题及解答
Q1：细胞不转移？
- 细胞侵袭转移能力比较弱；
- 基质胶浓度不合适，铺板太厚，需要做预实验摸索；
- 细胞量少，可以尝试增加细胞量；
- 细胞没有用PBS清洗1-2遍，用胰酶消化后，必须将含 血清的培养基洗去；
- 细胞的活性太差，活性不好的细胞做侵袭实验难度较大。
Q2：染色后细胞分布不均一？
- 小室未平衡放置于孔板中。
- 细胞悬液加入时局部过多。
- 小室有倾斜或晃动。
- 小室本身渗透膜不平。
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