产品简介

本产品为以RNA模板合成一链cDNA的经典反转录即用型预混液。产品中所含的核心逆转录酶，经过有效的技术改造，具有优异的热稳定性和模板亲和力，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板、少量模板以及低拷贝基因的逆转录。另外，本产品中含有gDNA消化组分，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。

本产品反转录产物，可用于下游qPCR应用。推荐搭配：通用多重qPCR探针法预混液（Cat#N132041）、通用qPCR染料法预混液（Cat#N132031）或可示踪qPCR染料法预混液（Cat#N132034、Cat#N132035、Cat#N132036）进行高性能的基因表达分析。

产品规格 

产品货号	N132061E	N132061S
产品规格	10 T	100 T

产品组分

组分编号	组分名称	N132061E	N132061S
N132061-A	RNase-free H2O	1 mL	2×1 mL
N132061-B	5×gDNA Digester Mix	30 μL	320 μL
N132061-C	4×cDNA Synthesis SuperMix	50 μL	500 μL

【注】：C组分4×cDNA Synthesis SuperMix中含有gDNA Digester终止剂。

产品储存

冰袋运输。-20℃保存。有效期18个月。

操作注意

1. B组分5×gDNA Digester Mix和C组分4×cDNA Synthesis SuperMix中均含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取。

2. 如果加入RNA模板体积较大（如超过 2 μL），请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA 去除以及反转录产生抑制。

3. 可以不经过基因组去除步骤，直接用C组分4×cDNA Synthesis SuperMix进行逆转录。

4. 反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途！

操作说明

1. 残留基因组 DNA 去除

在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

组分	使用量
RNase Free H2O	To 15 μL
5×gDNA Digester Mix	3 μL
Total RNA or mRNA	RNA：10 pg-5 μg mRNA：10 pg-500 ng

【注】：20 μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1 μg。如果目的基因的表达丰度低，最多投入5 μg Total RNA，否则RNA投入量过高，可能会超过后续定量PCR的线性范围。

2. 反转录体系配置

在第1步反应管中直接加入4×cDNA Synthesis SuperMix，用移液器轻轻吹打混匀。

组分	使用量
第1步反应液	15 μL
4×cDNA Synthesis SuperMix	5 μL

3. 反转录程序设置

1）标准程序

温度	时间
25℃	5 min
55℃	15 min
85℃	5 min

【注】：反转录温度推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃。

2）快速程序【适用于GC含量≤55%的模板或者简单模板】

温度	时间
55℃	15 min
85℃	5 sec

【注】：逆转录产物可立即用于 qPCR 反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。