产品简介

本产品通过加A尾法来进行miRNA第一链cDNA的反转录。产品中的酶及缓冲体系均经过精心优化，可保证miRNA 3'末端的Poly(A)修饰过程和逆转录过程同时高效进行。

本产品用于下游qPCR应用，仅需设计特异性正向引物，配合试剂盒中的通用反向引物，即可对样本中的 miRNA进行检测。此外，试剂盒中提供了人、大鼠、小鼠通用的U6内参上下游引物，可在宽广的区域内得到良好的标准曲线。

本产品推荐与miRNA qPCR染料法预混液（Cat#N132039）配套使用，以获得最优的实验结果。

产品规格 

产品货号	N132068E	N132068S
产品规格	10 T	50 T

产品组分

组分编号	组分名称	N132068E	N132068S
N132068-A	miRNA RT Enzyme Mix	17.5 μL	87.5 μL
N132068-B	2×miRNA RT Buffer	50 μL	250 μL
N132068-C	RNase-free H2O	2 mL	10 mL
N132068-D	Universal Reverse Primer (10 μM)	800 μL	4 mL
N132068-E	U6 Forward Primer (10 μM)	100 μL	500 μL
N132068-F	U6 Reverse Primer (10 μM)	100 μL	500 μL

产品储存

冰袋运输。-20℃保存，有效期 1 年。

操作注意

1. 使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。

2. 实验时，请使用无RNase污染的耗材，避免不必要的损失影响实验结果。

3. 本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途！

操作说明

1. 体系配置

室温融化A组分miRNA RT enzyme mix和B组分2×miRNA RT buffer后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：

组分	使用量	终浓度
2×miRNA RT buffer	5 μL	1×
miRNA RT enzyme mix	1.75 μL	-
RNA	-	X
RNase-free H2O	Up to 10	-

【注】：针对RNA样本，总RNA及提取的miRNA的浓度范围10 pg-2 μg，合成的miRNA拷贝数最低可达60 copies，投入体积不超过3.25 μL。

2. 反转录程序

移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行 miRNA 的逆转录反应：

反应温度	反应时间	备注
37℃	50 min	miRNA 加 A 尾及反转录过程
85℃	5 sec	酶失活过程

【注】：逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。为避免逆转录体系对qPCR反应的抑制，可将产物稀释10-1000倍后使用。若短时间内不进行下游实验，可放置于-20℃保存。若长期保存，建议分装后，于-80°C保存，避免反复冻融。